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細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的常見問題

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的常見問題細(xì)胞冷凍保存是細(xì)胞保留的主要方式之一。借助冷凍技術(shù)，將細(xì)胞置于-196℃的液氮中，可使其暫時(shí)脫離生長狀態(tài)并保持其細(xì)胞特性，以備日后在實(shí)驗(yàn)中復(fù)蘇使用。這一方法不僅可以預(yù)防正在培養(yǎng)的細(xì)胞遭受污染或其他意外情況而導(dǎo)致種群喪失，同時(shí)也發(fā)揮了細(xì)胞保護(hù)的功效。那么你知道細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的常見問題嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞凍存為什么要添加保護(hù)劑細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長期儲存的一種技術(shù)。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下冷凍，細(xì)胞內(nèi)外的水分會很...

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DMEM培養(yǎng)基的主要成分與應(yīng)用

DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的基本培養(yǎng)基。下面讓我們一起來看看DMEM培養(yǎng)基的主要成分與應(yīng)用吧！DMEM培養(yǎng)基的主要成分包括：糖類：例如葡萄糖，為細(xì)胞提供能量和碳源。氨基酸：作為蛋白質(zhì)合成的基本組成部分。維生素：如維生素B群、維生素C等，參與細(xì)胞代謝過程。礦物質(zhì)：包括鈉、鉀、鈣、鎂等，維持細(xì)胞內(nèi)外的離子平衡。胺基酸：例如谷胱甘肽、谷氨酰胺等，具有抗氧化和細(xì)胞保護(hù)作用。添加劑：例如胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等，為特定類...

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培養(yǎng)基制備的注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基的作用是為微生物提供生長和繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，因此對于微生物檢驗(yàn)而言，培養(yǎng)基的質(zhì)量控制尤為重要。那么你知道培養(yǎng)基制備的注意事項(xiàng)有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、配置要求正確地制備培養(yǎng)基是進(jìn)行微生物檢驗(yàn)的基礎(chǔ)。當(dāng)實(shí)驗(yàn)人員使用商業(yè)化脫水合成培養(yǎng)基來配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明進(jìn)行配制，并做好配制記錄。在配制過程中，實(shí)驗(yàn)人員需要遵守相關(guān)操作標(biāo)準(zhǔn)，戴上口罩以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末。在稱量和溶解培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)使用專...

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蛋白表達(dá)的常見問題

蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)的時(shí)，有時(shí)候?qū)嶒?yàn)會覺得參考實(shí)驗(yàn)方法和克隆的蛋白基因序列完q沒有問題，但蛋白電泳就是沒有結(jié)果。那么你知道蛋白表達(dá)的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1、載體構(gòu)建錯(cuò)誤，很多克隆新人常常弄錯(cuò)讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其復(fù)制位點(diǎn)常有一兩個(gè)堿基的差異；另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導(dǎo)致讀碼框錯(cuò)誤，從而無法表達(dá)出來。2、宿主菌選擇不當(dāng)。不同的宿主菌其基因型是不同的。有些經(jīng)過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動(dòng)子的載體，必須選擇適...

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PCR反應(yīng)體系包括什么

PCR是一種選擇性體外快速擴(kuò)增DNA片段的方法。在體外以類似于細(xì)胞內(nèi)DNA的半保留復(fù)制過程，以擬擴(kuò)增的模板DNA分子，與模板DNA互補(bǔ)的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應(yīng)體系，經(jīng)過重復(fù)地變性一退火一延伸三步，擴(kuò)增新的目的DNA鏈，這個(gè)過程通過控制反應(yīng)體系的溫度來實(shí)現(xiàn)。那么你知道PCR反應(yīng)體系包括什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板(template)模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA(如總RNA、...

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