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脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與方法

脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。帶正電的陽(yáng)離子脂質(zhì)體，DNA并沒(méi)有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過(guò)內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。下面讓我們一起來(lái)看看脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與方法吧！脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)先規(guī)劃好實(shí)驗(yàn)，一般細(xì)胞轉(zhuǎn)染需要24h-72h，所以要充分了解細(xì)胞生長(zhǎng)速度，計(jì)算所需脂質(zhì)體和DNA...

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實(shí)驗(yàn)中的抗體應(yīng)用問(wèn)題和解決方案

抗體是一種由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來(lái)鑒別與中和外來(lái)物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面?？贵w能識(shí)別特定外來(lái)物的一個(gè)特征，該外來(lái)目標(biāo)被稱為抗原。1.做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?不一定能通用。流式是用直接標(biāo)記還是間接標(biāo)記?如果是直接標(biāo)記的話，那這個(gè)抗體一般不是FITC標(biāo)記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標(biāo)記的抗體來(lái)直接標(biāo)記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用...

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一步法RT-qPCR實(shí)驗(yàn)優(yōu)化小技巧

常見(jiàn)的RT-qPCR流程一般分為RNA提取，逆轉(zhuǎn)錄、熒光定量PCR三個(gè)步驟，當(dāng)有的課題需要對(duì)某物種進(jìn)行多種處理后，檢測(cè)某個(gè)基因的表達(dá)水平，以驗(yàn)證該基因應(yīng)對(duì)不同脅迫壓力的耐受力；或者經(jīng)某種病原菌侵染后，檢測(cè)寄主不同基因的表達(dá)水平，以探究可能涉及的通路及互作機(jī)理等……對(duì)于這幾類樣本數(shù)量較大，但樣本只需要檢測(cè)一次的實(shí)驗(yàn)方案，我們常常推薦一步法RT-qPCR，即逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR配制一管體系，只需一次上機(jī)即可完成表達(dá)量的檢測(cè)。由于將RNA逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR的體系配制合為一步，...

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石蠟切片Protocol實(shí)驗(yàn)需要注意哪些要點(diǎn)呢？

石蠟切片是一種常見(jiàn)的組織學(xué)技術(shù)，用于觀察組織的微觀結(jié)構(gòu)。在進(jìn)行石蠟切片實(shí)驗(yàn)時(shí)，有許多細(xì)節(jié)需要注意，這些細(xì)節(jié)往往決定了切片的質(zhì)量和結(jié)果的準(zhǔn)確性。那么石蠟切片Protocol實(shí)驗(yàn)需要注意哪些要點(diǎn)呢？本期內(nèi)容將為你揭示一些關(guān)鍵的細(xì)節(jié)，助你獲得最佳的石蠟切片效果。1.組織固定1）取新鮮組織，分割塊的大小，宜小不宜大，一般不超過(guò)1cm3，用預(yù)冷的PBS沖洗，置于10%的福爾馬林固定液中固定24小時(shí)。2）取出組織，蒸餾水沖洗30分鐘。2.組織脫水，包埋，切片1）自動(dòng)脫水：設(shè)定脫水程序，7...

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細(xì)胞貼壁不均勻的原因有哪些呢？

在培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的時(shí)候，偶爾會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞接種后貼壁不均勻的情況。有的地方長(zhǎng)得非常密集，有的地方卻太稀疏。雖然這對(duì)于常規(guī)培養(yǎng)并不算大問(wèn)題，但有時(shí)則可能影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。所以一旦遇到貼壁不勻，建議排查原因并優(yōu)化操作方案。那么，造成細(xì)胞貼壁不均勻的原因有哪些呢？本期內(nèi)容一起來(lái)跟著小編的腳步學(xué)習(xí)一下吧！情況一：局部生長(zhǎng)密集，密集處呈不規(guī)則分布原因：一般是接種時(shí)沒(méi)有混勻，或者細(xì)胞傳代時(shí)沒(méi)有消化che底從而形成細(xì)胞團(tuán)塊導(dǎo)致的解決方案：繼續(xù)培養(yǎng)1-2天，待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，重新消化接種，接種時(shí)...

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